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Experiment 5 실험제목: 7) Restriction enzyme mapping of cloned DNA 1. Purpose cDNA가 vector내로 잘 들어갔는지 다시 한 번 확인하는 작업이다. 일부 제한효소는 방향이 역방향이 되기도 한다. 2. introduction Restriction Mapping이란 정체불명의 DNA에서 제한 효소 절단 부위들의 상대적 위치를 찾아내는 과정을 뜻한다. 이러한 Mapping 작업은 Restriction Enzyme의 특정 위치를 자르는 특성에 의해 DNA가 잘라지고 그에 의해 잘라진 DNA fragment들의 크기를 Electrophoresis를 통해 알아내는 것에 기초를 둔다. 가장 흔한 방법으로 몇몇 Restriction Enzyme을 가지고 단독으로..

Experiment 4 실험제목: Plasmid (mini) preparation from E.coli(Alkalilysis method) 1. Purpose E.coli에 삽입시킨 Plasmid를 Alkalilysis method을 통해서 Bacteria의 세포벽과 세포막을 파괴해서 넣은 plasmid를 추출한다.2. introduction E.coli Bacteria안 에는 Bacterial Chromosome과 Plasmid vector에 Ligation한 plasmid라는 두가지 DNA가 존재를 한다. 여기에서 Bacterial Chromosome를 제외한 Plasmid vector에 Ligation한 plasmid를 추출해야한다. 그때 사용되는 방법을 소개하고자 한다. Solution 1: 50..

Experiment 3 실험제목: plasmid transformation into E.coli(DH5α) 1. Purpose조합된 DNA를 E.coli(DH5α)에 transformation한다. 2. introduction Normal bacterium을 calcium chloride(CaCl2)를 처리해서 Normal bacterium의 membrane을 느슨하게 해준다. Ligation한 Plasmid를 넣고, ice처리를 해서 bacterium에 잘 들어갈 수 있도록 한다. 그 다음 heat shock 42℃를 2분 정도 처리(Plasmid가 bacterium에 쏙 들어가게 한다)후에 바로 ice상태로 2분 처리한다. 그러면 bacterium의 membrane이 쏙 닫힌다. 그렇게 만든 tran..

Experiment 2. 실험제목: 2) Elution of PCR product from agarose gel 3) Preparation of cloning vector(pBluescript) 4) Ligation of PCR product and vector 1. Purpose PCR 전기영동으로 확인, Gel elution, ligation. 2. introduction전기 영동을 시킨 DNA를 Gel상태에서 Elution시킨다. promoter부분인 Clark의 P34 Promoter Fragment 1와 PI의 P34 Promoter Fragment 1를 각각 동일한 제한효소로 처리된 T-vector에 삽입하는 것(형태는 DNA end의 두가지 형태 중에 blunt end를 사용)이 위 두 실험..

Experiment 1. 실험제목: 1) Amplification of interesting gene using PCR 1. PurposeArabidopsis의 FLOWERING LOCUST (FT)(개화촉진 유전자), RERMINAL FLOWER 1 (TFL1)(개화억제 유전자)가 콩 sequence에도 있는 지를 확인하고 콩에 있는 비슷한 서열의 유전자가 Arabidopsi의 유전자의 형질을 나타내는지 알아보기 위해 PCR을 통해 필요한 유전자 서열을 증폭. 2. introduction DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한..

탐 구실험명전분함량분석일 시****년 ** 월 ** 일 준비물 옥수수 전분{샘플(출사후 6)}, 수조, 25㎖ 볼륨플라스크, 10*100㎜ glass test tube, 1㎎/㎖ glucose standard, sodium acetate buffer, Amyloglucosidase 용액 등.탐 구방 법및절 차샘플준비0.5㎜의 입자로 샘플을 준비한다.16*120㎜ 의 glass test tube에 샘플을 250㎎ 넣는다. -전분함량이 높은 옥수수전분은 20㎎~100㎎을 사용한다.에탄올로 씻어낸다. (80% 에탄올 10㎖로 80℃에서 5분간 흔들면서 추출)원심분리 후 상징액 따라 버린다. 이 과정을 2번 반복.15㎖ 증류수를 첨가하고 흔들어 pellet을 섞은 후, 50㎖ tube에 넣는다. 100㎕ the..

조단백질 정량(crude protein) 실험보고서 원 리질소정량법으로는 여러 가지 방법이 있지만 1883년에 Kjeldahl씨가 제안한 방법이 오늘날 널리 이용되고 있다. 식품 중의 단백질을 구성하고 있는 질소를 분해 과정을 통하여 모두 황산암모늄의 형태로 바꾸게 된다(분해반응). 이 황산암모늄은 식품의 다른 여러 가지 분해물과 같이 존재하기 때문에 황산암모늄을 구성하는 질소의 양을 정량하기가 어려우므로 이 질소만을 따로 분리하기 위하여 과잉의 알칼리를 가하고 가열하면 황산암모늄중의 질소는 알칼리와 반응하여 암모니아( NH3 )로 되어 식품 중의 다른 분해물과 분리된다. 조단백질 정량식품을 구성하는 각 성분 중에서 질소를 함유하고 있는 것은 대부분이 단백질이다. 단백질은 다른 성분과 달리 평균 16%의..