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  • Experiment 1. Amplification of interesting gene using PCR
    ■ UNIVERSITY STUDY |대학공부/실험 · 실습 2017. 11. 2. 04:52

    <본 실험은 개인이 실험후 작성한 보고서 이므로 참고용으로만 이용세요>

    Experiment 1.

    실험제목: 1) Amplification of interesting gene using PCR

     

    1. Purpose

    ArabidopsisFLOWERING LOCUST (FT)(개화촉진 유전자), RERMINAL FLOWER 1 (TFL1)(개화억제 유전자)가 콩 sequence에도 있는 지를 확인하고 콩에 있는 비슷한 서열의 유전자가 Arabidopsi의 유전자의 형질을 나타내는지 알아보기 위해 PCR을 통해 필요한 유전자 서열을 증폭.

     

    2. introduction

    DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다


    3. Material & Method

    재료

    (cDNA 2, 5' Primer - 1x4 3' Primer - 1, 5X Buffe - 10, dNTP Mixture - 4, Prime Star DNA Polymerase 0.5, dH2O - 32.5) X4, Loading buffer(glycerol +bromo-3phenol blue(BPB)) 2, PCR Product 5, dH2O 5

     

    방법

    polymerase-chain-reaction(PCR) 만들기

    4개의 튜브를 준비하고 각각 2개씩 GmFT GmTFLGmFT(1~2), GmTFL(3~4)으로 주기표시를 한다.

    Template(cDNA)2씩 각 튜브에 주입한다.

    cDNA가 들어있는 튜브에 5’-primer 3’-primer을 각각 1씩 주입.

    GmFT (S=MG-982, AS=MG-984)

    GmTFL(S=MG-618, AS=mg-619)

    5X buffer10씩 넣는다.

    dNTP mixture4씩 넣는다.

    dH2O31.5넣는다.(이는 5Xbuffer를 희석시키기 위해 31.5를 넣음)

    prime star DNA Polymerase0.5를 넣는다.

    Total Volume50가 되어야 한다.

    PCR base기계에 942분간 돌려준다. 이는 Pre-denaturation 과정이다.

    9430sec denaturation과정이다.

    GmFT 5530sec, GmTF6030sec를 돌려 준다. (annealing 과정)

    7230sec 이는 extension 과정.

    10~12번 과정을 반복하여 DNA를 증폭시키는 과정이다.

    남은 7210min을 돌려서 아직 다 만들어지지 않은 DNA 남은 부분을 보완하는 과정을 거친다.

    4에 보관

     

     4. Result

    전기영동을 통해서 나온 결과는 TFL1500bp 자리에서 깨끗이 잘 나온 반면 FT는 하나는 안 나오고 하나는 희미하게 나왔다.

    5 primer가 첫 번째 조원 실험자가 많이 사용하여 두 번째 실험자 사용할 양이 부족해 결과가 나오지 않은 것 같다.

     

    PCR후 전기영동_DNA 5ul

    5. Discussion

    처음으로 PCR에 대해서 실험을 처음이라서 많은 것을 알수는 없었지만 pcr이 무엇인지는 확실히 배운것 같다. 그래도 오늘은 이정도만 알아도 어느 정도의 성과가 있는 것 같다. 역시 실험을 해보아야 그 과목을 알수 있는것 같다. 또한 cDNA는 필요한것만 볼수 있게 도와주는 역할을 하며 항상 5X buffer1X로 만들어사용 해야해야만 좋은결과가 나온다는 것 알았다.

     

    6. Reference

    작물분자유전학 실험 프린트물, 필기 참조

    위키백과사전(인터넷)

    유전학의 이해(라이프사이언스)-전상학외4

    필수유전학(월드사이언스)-송동민 외12

    유전학원론(월드사이언스)-Simmons, Michael J.

    최신 유전학(범하서적)-Simmons, Michael J. 5


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